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常用的免疫組化染色方法很多，有直接法和間接法。直接法是將酶或熒光素等標(biāo)記在第一抗體上，然后用該被標(biāo)記的第一抗體與組織細(xì)胞中的抗原結(jié)合，即可以顯色或在熒光顯微鏡下觀察結(jié)果；

間接法是將標(biāo)記物標(biāo)記在第二抗體或第三抗體（復(fù)合物）上，其方法是先將特異性的第一抗體與組織細(xì)胞中相應(yīng)的抗原結(jié)合，再將被標(biāo)記上標(biāo)記物的第二抗體與第一抗體結(jié)合，最后用顯色劑顯色或在熒光顯微鏡下觀察結(jié)果。

如果標(biāo)記物是標(biāo)記在第三抗體（復(fù)合物）上，則第二抗體與第一抗體結(jié)合后，再用被標(biāo)記上標(biāo)記物的第三抗體（復(fù)合物）與第二抗體結(jié)合，最后用顯色劑顯色或在熒光顯微鏡下觀察結(jié)果。

01  ABC 法  

卵白素-生物素復(fù)合物（avidin biotin complex，ABC）法屬于親和免疫組織化學(xué)技術(shù)，該方法是根據(jù)卵白素和生物素具有高度親和力的生物學(xué)特性，用生物素與過氧化物酶結(jié)合獲得生物素化過氧化物酶，生物素化過氧化物酶再和加入的卵白素形成卵白素-生物素-過氧化物酶復(fù)合物即ABC復(fù)合物。

ABC法為三步法，第二抗體為生物素化的IgG，其中的Fab片段和第一抗體結(jié)合，生物素和ABC復(fù)合物中的卵白素結(jié)合，最后通過ABC復(fù)合物上的過氧化物酶參與顯色反應(yīng)而形成有顏色的不溶性沉淀物。由于卵白素和生物素的親和力很強(qiáng)，所以ABC法較敏感，比PAP法敏感20～40倍。

   

02  LSAB（S-P) 法 

標(biāo)記抗生物素蛋白鏈菌素-生物素（lablled streptavidinbiotin）法和ABC法相似，不同處是在第二抗體之后ABC法用ABC復(fù)合物而LSAB法用標(biāo)記了過氧化物酶的抗生物素蛋白鏈菌素（streptavidin，SA）。SA是從鏈霉菌屬蛋白分離出來的一種蛋白質(zhì)，它僅標(biāo)記了過氧化物酶而本身沒有與生物素連接，生物素是連接在第二抗體上。

由于SA分子量較小，ABC復(fù)合物分子量大，因而SA穿透組織的能力比ABC復(fù)合物大，反應(yīng)速度快。SA有兩個和生物素親和力*的結(jié)合點，其本身沒有連結(jié)生物素，可以與第二抗體上的生物素連結(jié)。這樣，SA比ABC復(fù)合物更容易與第二抗體上的生物素結(jié)合，因而SA的敏感性比ABC高，反應(yīng)所需的時間比ABC短。

如在實驗中遇到困難，也可以選擇Leica全自動免疫組化染色儀來協(xié)助您。

下期預(yù)告

酶標(biāo)聚合物（labelled dextran polymer，LDP）法

增強(qiáng)聚合物一步（enhanced polymer one setp，EPOS）法

催化信號放大（catlyzed signal amplification，CSA）法

抗生物素蛋白鏈菌素-生物素復(fù)合物（streptavidin biotincomplex，SABC）法